HOPE-SIM冷冻结构光照明显微镜
型号: HOPE-SIM(自研)
安装时间:2022年6月
主要性能和指标:
配备高真空冷台,可以实现冷冻、常温荧光成像;配备405nm/488nm/561nm/640nm四通道固体激光器,Photometrics 95B CMOS相机;100倍0.9NA光学物镜;配备冷冻多样品杆;配备三维冷冻光电关联软件3D-View。
1,冷台内极限真空优于5×10-4Pa;
2,过程中冷冻样品温度波动小于±2度;
3,可适用光学物镜工作距离优于2mm;
4,可实现冷冻三维结构光照明超分辨荧光成像、宽场成像;
5,可实现横向约200nm、纵向约600nm的冷冻光学分辨率。
主要功能和服务范围:
作为一套独立的冷冻三维结构光照明显微镜用于实现冷冻样品的三维高分辨率荧光定位和冷冻光电关联成像,助力解析胞内目标分子的原位超微结构。
仪器说明:
面向原位结构解析的冷冻电子断层成像(cryo-ET)是研究生物大分子复合物的原位高分辨率结构及其相互作用关系的关键技术。但受限于电子束穿透能力,需要先利用聚焦离子束(cryo-FIB)将细胞和组织样品减薄成200纳米左右的薄片后才能进行cryo-ET数据采集。冷冻光电关联成像技术可以为cryo-FIB精准制备包含特定目标结构的冷冻含水切片提供荧光定位指导,但是冷冻荧光显微镜的光学分辨能力以及光镜、电镜图像的对齐精度是制约冷冻光电关联实验成功率的关键因素。为了解决上述技术瓶颈,中国科学院生物物理所蛋白质科学研究平台生物成像中心一直致力于开发新型冷冻光电关联成像技术,在前期自主研发的冷冻光电关联成像高真空冷台HOPE(Journal of Structural Biology,2017)基础上,通过引入结构光照明成像技术,成功研制了冷冻结构光照明成像系统HOPE-SIM,实现了横向优于200纳米的光学分辨率,以及优于150纳米的光镜-聚焦离子束三维关联对齐精度,该研究成果于2023年4月29日在线发表在学术期刊Communications Biology上。