1. 肿瘤相关巨噬细胞在保护肿瘤抵抗HER2/neu抗体治疗中的作用及以肿瘤相关巨噬细胞为靶点的免疫治疗
在前期研究发现肿瘤浸润巨噬细胞在抗HER2/neu抗体肿瘤治疗耐药中发挥重要作用的基础上，通过系统研究发现：向肿瘤输送IL-21能够将促进肿瘤生长、抑制抗肿瘤免疫的M2型巨噬细胞极化为抗肿瘤、促进抗肿瘤免疫的M1型巨噬细胞，从而显著促进抗HER2/neu抗体的肿瘤治疗效果，增强赫赛汀抗肿瘤效果。在上述研究成果的基础上，构建了人源化新型融合蛋白IL-21/Herceptin融合蛋白，已经完成体外功能鉴定，证明具有与赫塞汀和IL－21同样的生物学效应。目前，我们正尝试建立人源化人肿瘤小鼠模型以证明其体内优于赫塞汀的抗肿瘤效应。该部分研究结果投稿Journal of Immunology正在修稿中。
2．慢性肝炎纤维化、及恶性转化的分子机制研究
我们在前期研究中建立了慢性肝炎小鼠模型，即给HBV 转基因小鼠注射抗共刺激分子4-1BB 抗体，可以诱导小鼠发生非特异性T淋巴细胞介导的小鼠肝脏慢性炎症，进而发展成肝纤维化、肝硬化和肝癌，较好模拟了临床上从慢性肝炎到肝癌的发展过程。在此基础上，在不同时间点采集小鼠的肝脏组织标本，分离纯化microRNA，采用高通量的qPCR技术对microRNA分子的表达进行定量检测。我们合成了166对microRNA引物，完成了肝炎后期四个不同病程时期的共12份标本的microRNA检测，建立了慢性肝炎恶性转化过程中的microRNA表达变化谱。其中10种MicroRNA分子的表达水平随着病程的进展呈不断升高的趋势，3种MicroRNA分子的表达水平随着病程的进展呈不断降低的趋势。
我们在不同的纤维化模型中对上述高通量数据中有差异表达的microRNA分子进行了进一步的检测，我们利用四氯化碳构建了小鼠的纤维化模型。对野生型小鼠连续腹腔注射8次四氯化碳构建了进展期模型；对小鼠连续腹腔注射4次四氯化碳，一个月之后收集样本构建了纤维化消退期模型，通过对不同阶段的比较能更细致地观察候选microRNA分子与纤维化之间的关系。结果发现在CCL4诱导的小鼠纤维化肝脏样本中，候选microRNA分子的表达趋势与2A纤维化阶段肝脏中的趋势一致，其中miR-34a显著上调与病程呈现正相关，而miR-148a与纤维化病程负相关（图1）。
图1：在CCL4小鼠纤维化模型中对候选microRNA分子进一步验证（A）qpcr检测野生型小鼠肝脏、纤维化进展期肝脏和纤维化消退期肝脏中纤维化marker α-SMA、TGF-β、Col1a1、Col3a1的表达水平。（B）qpcr检测野生型小鼠肝脏、纤维化进展期肝脏和纤维化消退期肝脏中候选microRNA分子的表达水平。
为明确候选microRNA分子主要作用的细胞类型，于是分离纤维化小鼠肝脏各个细胞组分，提取RNA利用qpcr检测候选microRNA分子在其中的表达水平。结果发现纤维化期肝脏各细胞均大幅度上调miR34a的表达，在HSC细胞中尤为明显；在肝实质细胞中miR-148a高表达，且在纤维化进程中下调（图2）。在纤维化小鼠的肝脏中过表达miR-148a来检测其对纤维化进程的影响。对野生型小鼠连续腹腔注射8次四氯化碳构建了进展期模型，在病程后两周同时进行尾静脉高压注射miR-148a前体片段的表达质粒，在终点对肝脏样本进行天狼星红和qpcr检测。结果显示随着miR-148a的分子的过表达，纤维化进程被阻断（图3）。目前正在对miR-148a调控肝脏纤维化的分子机制进行深入探讨。
图2：（A）在纤维化小鼠和野生型小鼠的肝脏各细胞组分中利用qpcr对miR-34a分子的表达水平的检测。（B）在纤维化小鼠和野生型小鼠的肝脏各细胞组分中利用qpcr对miR-148a分子的表达水平的检测。
图3：小鼠纤维化模型中过表达miR-148a 抑制纤维化病程的进展（A）对检测野生型小鼠、纤维化期对照组小鼠和高压注射miR-148a表达质粒的小鼠肝脏石蜡切片进行天狼星红染色。（B）qpcr检测野生型小鼠、纤维化期对照组小鼠和高压注射miR-148a表达质粒的小鼠肝脏中miR-148a 和纤维化markerα-SMA的表达水平。
3．记忆性CD8+ T细胞形成的分子机制的研究
我们在前期研究中，建立了记忆性T细胞体外分化模型，利用质谱技术获得了记忆性T细胞和效应性T细胞在蛋白质组水平上的差异表达数据。随后，我们利用生物信息学手段，并参考本领域的最新研究进展，选定记忆性T细胞形成过程中的代谢模式的转化及其分子调节机制作为目前的研究重点。对谷氨酰胺在记忆性T细胞和效应性T细胞中的代谢模式和通路，进行深入研究。这部分研究结果正在投稿中。Sirt1分子是重要的NAD+依赖性去乙酰化酶，参与调节多条代谢通路。我们发现，Sirt1及其下游分子PGC-1α在记忆性T细胞中高表达。我们建立了高效T细胞病毒转染系统，通过基因的敲低和过表达，研究PGC-1α调节记忆性T细胞分化的作用及其机制。
4．去SUMO化修饰酶SENP1在DCs发育和分化中的调控作用
树突状细胞（dendritic cells, DCs）是一群异质性细胞的总称，是免疫系统中最重要的抗原提呈细胞，是连接天然免疫和获得性免疫的关键桥梁。DCs按照来源和功能的不同可以分为许多亚群，不同DCs亚群的分化和成熟过程均有特定的转录因子调控。以往的DCs分化机制研究主要集中于骨髓淋巴系和髓系前体细胞向DCs的分化，但对于循环单核细胞在体内向DCs分化的分子调控机制还不太清楚。我们前期研究发现，去SUMO化修饰酶SENP1基因缺失的骨髓重建嵌合体小鼠淋巴细胞和髓系细胞发育存在缺陷。体内和体外诱导分化实验，发现SENP1基因敲除小鼠在DCs发育和分化的多个不同阶段均存在缺陷，并且，SENP1特异性地调控单核细胞来源的DCs的分化过程，但不影响单核巨噬细胞的分化。为了特异性SENP1基因缺失对DCs分化和功能影响，我们从上海交通大学引进SENP1-/-LoxP小鼠，进行繁殖，与CD11c-Cre小鼠交配，已获得近40只SENP1-/-Cre+/-小鼠，目前正在利用这些DCs特异性SENP1条件性敲除小鼠研究SENP1调控DCs分化的作用机制。
